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12

2023

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16HBE(HBE135-E6E7)细胞培养攻略

作者:


【货号】 BC-C-HU-012

【规格】 1*106个/T25培养瓶(或冻存管)

【保存】 液氮保存,长期

【产品介绍】

英文名称

16HBE(HBE135-E6E7)(STR鉴定正确)

中文名称

人支气管上皮样细胞(STR鉴定正确)

种属

人源

组织来源

支气管

生长特性

贴壁生长

细胞形态

上皮细胞样

传代比例

1:2-1:3

换液频率

2~3次/周

培养体系

 KM (角质细胞专用培养基) ,添加对应因子,添加0.005mg/ml胰岛素,500ng/ml氢化可的松,1% P/S

培养条件

5% CO2 ;37℃

冻存条件

冻存液:50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO;液氮中长期保存。

生物安全等级

1

 

【细胞简介】

目前16HBE细胞在市面上的源头已经停售,如果有使用16HBE细胞的都是假的细胞报道,目前都是鉴定错误的细胞,如果要选择同类型细胞建议使用该细胞,即HBE135-E6E7,正常的人支气管上皮样细胞,来源为ATCC的CRL-2741。

【细胞培养注意事项】

建议细胞前三次传代中冻存部分细胞,后续遇到问题可重新复苏;

部分细胞传代后细胞内出现黑色小点,细胞间隙内出现少量颗粒物或者培养基中浮游着少量死细胞等均为正常现象,对细胞的增殖及试验无影响。

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片,可以吸去细胞悬液后用PBS进行清洗;如若PBS清洗后未能清除的碎片,可以用胰酶消化细胞重新接种,如果碎片较多,建议用PBS多清洗几遍。

16HBE(HBE135-E6E7)细胞,贴壁较牢,建议消化5min后镜下观察,若未消化下来可适当延长时间,注意消化时间,每隔两分钟观察消化程度,防止细胞消化过度。

使用0.25% Trypsin-EDTA(BC-CE-005)消化后,由于KM(角质细胞专用培养基)是无血清培养基,其无法终止胰酶消化,所以消化完全后用带有10%血清的培养基来终止消化,再进行后续操作。

注意此细胞需要使用KM专用的培养基,建议查找KM专用培养基购买使用。

注意此细胞不能擅自更换除KM专用培养基以外的其他培养体系;

培养体系严格来讲:KM (角质细胞专用培养基) ,添加对应因子,再添加0.005mg/ml胰岛素,500ng/ml氢化可的松,1% P/S ,即除了角质细胞专用培养基KM以外,需要额外购买和添加胰岛素以及氢化可的松,这点非常重要。

细胞传代处理后的第二天,在显微镜下观察细胞状态,如死细胞较多且细胞密度较低,需要进行换液操作,也可视情况而定。

【细胞培养问题】

1.Beas-2b细胞和HBE细胞有什么区别?两个细胞怎么选择?

Beas-2B是从正常人支气管上皮中分离的上皮细胞,其来源于非癌症个体的尸检。这些细胞保留了响应血清进行鳞状分化的能力,并可用于筛选具有诱导或影响分化和/或致癌作用的化学和生物试剂,细胞用腺病毒12-SV40病毒杂交病毒感染并克隆。细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性。

HBE135-E6E7细胞系来源于正常的支气管上皮,该上皮取自因鳞状细胞癌接受肺叶切除术的人。用含有人乳头瘤病毒(人乳头瘤病毒)E6E7基因的重组逆转录病毒LXSN16E6E7感染第一次传代的原代外植体细胞。在0.4毫克/毫升G418存在下选择细胞。该细胞系可用作cDNA微阵列研究中的参照,以证明与临床结果或肿瘤生物学相关的肺癌谱。

两种细胞在ATCC解释中都为正常的人支气管上皮细胞,区别主要在于这两种永生化细胞使用的构建永生化的病毒不同,此外,HBE细胞相对来讲培养条件更为苛刻,用于实验研究时,需要查找参考文献来选择合适的细胞。

  1. HBE细胞可以用有血清的培养基来培养吗?

经过本实验室的尝试,HBE细胞只能用无血清的KM角质细胞专用培养基来培养,不可擅自更换培养体系和添加血清,实验结果如下:

①HBE细胞试培养验证结果,KM专用培养基:

       

图:原培养体系,角质细胞专用培养基培养形态图,KM专用培养基。

②DMEM/F12培养基加10%胎牛血清培养的验证结果:

传代一次后:

 

-


传代三次后:

  

DMEM/F12培养基加10%胎牛血清培养的验证结果:

细胞在传代一次后,细胞贴壁良好,但细胞出现两种形态,部分细胞形态异常,传代三次后,细胞形态并无改善,形态异常的细胞仍然存在。

③:市面上的HBE细胞专用培养基(非角质细胞专用培养基):

市面上的HBE细胞专用培养基验证结果:

     细胞在传代一次后贴壁良好,形态较为正常,但传代三次后,细胞出现大量漂浮和死亡,原因不明,相比角质细胞专用培养基,可能缺乏了相关的添加剂。

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