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18
2025
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08
小鼠骨髓来源间充质干细胞分离培养小解
作者：
小鼠骨髓间充质干细胞来源于实验小鼠的正常骨髓血组织，CD44免疫荧光染色为阳性，CD45免疫荧光染色为阴性。
小鼠骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞，对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核细胞总数的0.001%~0.1%，含量极低。却占据着不可或缺的角色，主要包含以下几种作用：
首先，多向分化能力：可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等，是组织工程研究的核心材料；
其次是其低免疫原性：表面MHC-II类分子表达低，异体移植排斥反应弱；
第三相对来说比较容易获取：通过骨髓穿刺即可获得，无需复杂手术。
以下是总结目前比较常见的分离小鼠骨髓间充质干细胞的方式和方法，主要包括两种：
第一种是通过密度梯度离心法，骨髓中不同细胞的密度不同。通过Percoll或Ficoll密度梯度离心，可将低密度的BMSCs（1.03-1.07 g/mL）与红细胞（1.09-1.11 g/mL）、粒细胞等有效分离。
第二种是骨片消化贴壁筛选：该细胞具有贴壁生长特性，而造血系细胞（如淋巴细胞）悬浮生长。通过更换培养基去除未贴壁细胞，可实现进一步纯化。
其余还包括磁珠分选法等专一高效的方法，但相对来说也需要更高的技术成本和投入。
下面简单介绍一下骨片消化贴壁法，首先配制细胞培养所需的完培，可选择高糖DMEM作为基础培养基，再加入20%的胎牛血清以及1%的双抗；
其次是动物的选择，选取6-8周龄的雄性小鼠作为原材料，断颈或者CO2安乐死后75%酒精清洁消毒后剥离小鼠胫骨和股骨。
再将胫骨两端用弯剪减掉两端暴露中空部分，再使用注射器吸取高糖DMEM冲洗中间骨髓部分，明显看到骨头有粉红色变为白色或者淡粉色；
将收获的细胞悬液过40um细胞滤器，以去除杂质等；再将剩余的骨头（股骨/胫骨）剪碎（2mm3左右大小），加入2mg/ml的I型胶原酶），再将骨头放入其中，37℃消化10-20min，主要以骨头变白或者颜色变浅或者用无菌枪头轻微按压些微变软为标准；
将消化后的骨头加入到含10%血清的培养基中，离心后去除上清液，再将骨头轻缓用无菌镊子或者用尖端修剪（尖端减掉0.3mm左右，使得开口变宽）的0.1ml移液器吸取少量完培重悬重悬骨头。再将之前提取的细胞重悬后转入培养容器中，加入适量的完培；48h后骨骼边缘也会有部分细胞爬出，呈现聚团生长。
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