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27

2023

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细胞发生空泡怎么办?

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细胞空泡化”在细胞培养中也是一个常见问题,它的出现原因有多种,不少客户碰到往往会很头疼。

实际上有不少细胞本身就存在一定的空泡,如HepG2,Caco-2等细胞。除此之外,本期我们给大家列举出了可能出现这种情况的原因,方便大家进行分析选择解决的方法。如果有更多建议可以评论区与我们留言互动。

问:可以引起细胞空泡化出现的原因有哪些?

答:1)细胞老化

原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况,是有些细胞处于终末分化状态,不会再分裂,时间长了就会空泡化而死亡。

传代细胞出现这种状况比较少见,出现的原因一般都是因为细胞传代次数过多,老化严重。

2)PH值

培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大。

3)胰酶消化

胰酶消化时间过长,会导致细胞状态受损,有时也会出现这种情况。除此之外,如果消化细胞吹打时力度过大,产生太多气泡,长期存在也会出现这种现象。

4)自噬

5)细胞代谢

在细胞培养过程中,由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题,内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。

6)污染

衣原体感染:一旦一些细胞出现空泡化,继续培养,空泡范围会扩大,即使传代后也如此,出现这种情况,细胞基本无法挽救。后来检测发现,此种细胞存在衣原体的感染。

支原体污染:支原体污染在不严重的时候细胞是没有什么明显症状的,而且也无法通过光学显微镜观察到,只有在严重的时候会导致细胞状态变差,出现细胞空泡化的现象,细胞膜上也会出现小黑点附着。

7)药物诱导

一些特定的诱导剂处理,是细胞质空泡化的原因,一般是需要观察细胞变化而对细胞进行的特殊处理。

 

问:遇到细胞空泡化我们应该如何解决?

:1)如果是因为细胞老化的原因,可以通过复苏代数靠前的细胞进行培养。

2)如果是培养液PH的问题,可以通过更换培养液调整到合适的PH值,再进行培养。

3)在传代时,要选用合适浓度的胰酶和选取适当的消化时间进行消化,在操作时避免吹打太过用力出现太多气泡。

4)要保证细胞培养所需的营养充足,可以通过增加血清浓度和在培养基中加入谷氨酰氨解决。

5)尽量使用质量好和渠道正规的胎牛血清,因为这样的血清营养丰富且外源刺激因子少,可以有效的避免出现这类问题。

6)在细胞培养时要严格进行无菌操作,操作时要规范,避免污染。可以通过试剂盒检测细胞是否污染,对于已经污染的细胞灭菌后直接处理,避免污染其他细胞。

胞质空泡化可以是可逆的,也可以是不可逆的。可逆的胞质空泡化通常只是在暴露于诱导剂后能观察到,这种胞质空泡化可以引起细胞状态的改变或者细胞周期停滞。而不可逆的胞质空泡化会导致细胞死亡,许多自然或者人工合成的化合物以及被细菌或者病毒感染后均会出现不可逆的胞质空泡化,因此出现这种情况,细胞便不可再用于后续的实验中。

 

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