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06

2023

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06

生航生物 “黑胶虫”污染解决方案

作者:


黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物,“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。

“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。

目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物,增殖缓慢但对细胞有损害,数量达到一定程度可引起细胞死亡,其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在,解决该问题是一个世界性难题。

关于是什么的问题的讨论

A. 玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西(曾经有文献报道过)

B. 据说这是黑胶虫,又有人说是原生动物,好像也没个统一的说法

C. 据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。

D. 有人说是纳米级的细菌

其他的特点

(1)形态上有些像细菌,直径约在0.5~1微米,

(2) 在400X倒置显微镜小,有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)。

(3) 细胞内好像也有存在

(4) 但并不引起培养液混浊

(5) 时间稍长,细胞状态明显恶化,并最后死亡

大家的处理:

1.换好一点的血清(我觉着和血清的关系不大)。

2.如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解。若是悬浮的话,就不太好处理拉,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞,这种细胞不分裂,过一阵就死掉了,做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度。

3.换用进口的一次性塑料培养瓶。

4.建议清理无菌室所有物品,重新灭菌,用KMnO4熏蒸,按首次使用无菌室做,细胞重新复苏。

5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响。

6.有材料称minocycline具有一定的作用,可以和换液结合起来使用。

在细胞培养实验中,人们遇到的胶虫并不都是一样的,有像细菌的、有像支原体的、有像原虫的、有像真菌的,还有像细胞碎片的。在国内个实验室的器材条件参差不齐,而且实验人员的操作质量也不尽相同,同一种现象也可能有些许差异,当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小。所以很多人看到细胞被细菌污染了,不好处理,而却描述出来的现象和流传的黑胶虫类似,就会把培养失败的原因归结到无法处理的胶虫污染,甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。这样的事情多了,黑胶虫就会人为的变种,像什么的都有。黑胶虫是否存在,还有待于科学的发展。但有一点可以肯定的,大部分人发现的“胶虫”并不是真正那个未知的胶虫,而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染。

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3、支原体清除试剂 (附图片)

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