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01

2023

-

06

ELISA试剂盒常见问题解答

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1、LISA实验中的样本如何处理?

用于ELISA实验的样本有多种类型,包括血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。合适的样本预处理,是确保ELISA实验准确性的第一步。

血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集,离心20分钟左右,收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右,仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

注意:标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2、ELISA实验中标准曲线和样本重复性差的原因分析。

  • 实验操作中加样本及试剂量不准、孔间不一致

需要校正移液器,枪头要配套,移液时遵循慢吸快打的原则,样品稀释前应充分混匀。重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致。

  • 加错样本

检查实验记录和试剂,确认是否加错样本。

  • 血清标本未完全凝固即加入

待血清标本完全凝固后做试验,否则反应孔内易出现纤维蛋白凝固或残留血细胞,易出现假阳性反应等。

3、ELISA实验中标准曲线佳但样品孔无信号情况处理建议。

  • 样品中无检测物或表达量极低:设置阳性对照,重复实验观察实验结果。

  • 样本有无使用防腐剂:ELISA实验操作中切勿使用NaN3防腐剂,否则会破坏辣根过氧化物中的活性酶,影响实验结果。

4、ELISA实验数据样本值显示非正常的原因有哪些?

  • 不正确的收集或保存:需要确保正确的底物体积混合。如果底物是冻干粉,用相应缓冲液重悬完全,充分混合并在一定时间内使用。

  • 不正确的样本制备:一般试剂盒中说明书中样本制备方法已经过性能测试验证,严格按照说明书推荐进行。确保使用正确的校正稀释液

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