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25

2023

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05

病理染色常见问题(二)

作者:


病理染色是我们在临床诊断以及科研实验中常用到的一种诊断方式,其中较为常用的技术手段会有石蜡切片以及染色液染色。只有将各个部分都保质保量地完成制作后,才可以得到理想中的病理染色切片,从而获得的诊断结果以及进一步的实验数据。但是我们在实验中,病理切片的质量总会因为各种情况难保出现参差不齐的情况,所以,我们搜集各类相关文献,根据实验经验,给大家整理归纳出了石蜡切片以及染色液染色中会出现的一些常见问题,并且按照每一种出现的情况来进行深入的原因讨论,寻求针对的解决方案。

由于实验中导致结果出现误差的原因多种多样,我们给出的问题出现原因以及处理办法仅供参考,具体情况同样需要根据实际情况进行判断。

1、苏木素染色过淡:染色后的切片镜下观察细胞核颜色暗淡苍白。此类情况可能是因为苏木素在染色是在切片停留时间不足,导致,也有可能是因为苏木素在使用前被氧化,从而导致了染色能力的下降。

解决方案:在遇到此类情况首先我们可以重新制作切片之后再染色,针对性增加苏木素染色液的染色时间,同时也可以将pH值通过酸性溶液适当调低,从而可以增加苏木素染色的针对性。

2、核染出现红棕色:此类情况一是因为苏木素在使用前出现了过度氧化,从而导致了在进行核染时出现切片的反蓝不够,第二种情况是在使用伊红染色时出现失误导致细胞核染色也被伊红覆盖。

解决方案:此类情况需要在染色前检查苏木素的品质情况,如果发现苏木素出现严重的氧化情况,需要尽快更换新鲜苏木素,在染色后的反蓝也需要保证时间充分。

3、伊红染色不着色:染色切片在镜下观察发现伊红染色的部分颜色过淡甚至不着色,此类情况主要是因为伊红染色液中pH值超过了核定水平,或者是切片时太薄,导致染色后颜色过浅,还有情况是在乙醇脱水时停留过久,洗去了部分未完全染色的伊红染液。

解决方案:不着色的情况首先需要先检测伊红染色液的pH值,染色液的pH值受到实验情况的影响较大,所以需要在进行实验前对于染色液进行检测,在pH值升高的情况下会导致染色效果变差。同时还需要对于切片厚度进行检查,如果过薄的石蜡切片会导致在酒精中脱水时稀释其中的颜色。在蓝化后需要将其中的溶液完全清洗干净后再进行下一步染色操作。

4、镜下观察起水雾:在镜下观察时切片有凝集的水珠,或者是有雾气存在,此类情况主要是在切片染色后未完全脱水,或者是没有按步骤进行脱水,从而导致镜下观察水分不能全部排出。

解决方案:首先要将盖玻片移去后将固定物进行溶解,然后再在乙醇中重新进行脱水,连续脱水后再次固定便可以解决此类问题。

5、切片脱蜡有白点:此类情况主要表现是脱蜡后切片中出现白色的斑点,此类情况出现的可能原因是在烤片是温度不够,时间不足导致切片未完全干燥,还可能是二甲苯未按规定时间在切片上停留,导致脱蜡不完全。

解决方案:此类情况需要保证完全的烤片时间,将其中的水分清除干净后再进行下一步操作。如果过烤可能会导致整个切片报废,时间需要适当控制,同时对于脱蜡时间树妖控制完全,如果脱蜡时间不完全,也会导致切片中出现白色斑点,此类情况可以通过漂白来重新进行染色。

6、苏木素染色过深:此类情况的出现会导致染色液挤占细胞中细胞质的位置,这种情况主要会有三种情况,一是苏木素在使用中分步骤处理时时间太短;二是苏木素染色时染色时间过长,导致颜色过深;三是因为苏木素的pH值偏高,导致细胞质也被染色。

解决方案:苏木素过染的情况首先要检查石蜡切片是否过厚,如果过厚需要重新切片染色,如果不是切片问题,需要适当缩短苏木素的染色时间,并将分化适当延长。

7、切片出现沉淀物:切片中的沉淀物一会是蓝黑色的表现,此类情况是由于苏木素在染色时会有一层金属膜,此类金属膜操作不当会附着在切片上影响观察。

解决方案:切片中有蓝黑色的斑点主要是因为染色液中的沉淀,在染色前可使用过滤膜进行过滤,同时需要检查是否有金属膜附在溶液表面。

8、细胞质红色过染:此类情况的出现主要是因为其中的伊红染色液溶液浓度过高,并且染色后脱水处理时未完全脱水,导致细胞质过染,还有可能是伊红染色液染色时间过长。

解决方案:可以将伊红染色适当延长,并且在乙醇脱水时可将时间适当延长。

9、染色时染色不均:染色后出现部分斑点或者是大多数均分布不均,染液会散布在切片周遭,导致核内染色以及细胞质的染色分布受到影响。

解决方案:此类情况可能是因为染色固定时间不足,导致染色出现不均匀情况。在分化时需要进行充分抖动,抖动不均也会导致染色不均。

10、染色细胞核蓝灰:在染色过程中细胞核颜色状态不对,其中出现的情况可能会是由于在染色过程中加温台的温度设置过高,在固定组织的时候时间未完全达标,导致组织固定不充分。

解决方案:此类情况可能是因为组织没有与石蜡充分接触或者是在石蜡溶液中停留时间较长,可以将组织包埋后放在冷风下进行冷凝后重新融化石蜡包埋,如果是停留时间过长,可以重新进行脱水处理。

本次整理归纳了HE染色液的常见的10种问题,相对来说每一种问题出现的次数并不一致,有些会时长出现,有些出现的次数并不是很多,但是这10种问题对于科研中研究病理切片以及医院中直接进行临床诊断会有直接的影响,我们搜集整理的此类问题的解决方案希望能够给大家一些帮助。

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