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22
2023
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05
细胞培养之血清使用注意事项
作者：
血清是细胞培养中唯一外源添加的成分不确定的物质，血清的质量对实验成败起着关键性作用，但血清使用不当也可能会导致血清质量下降，造成细胞培养效果不理想。BioChannel来给大家聊聊血清使用中的一些疑惑，帮助大家理清头绪，实验开展顺顺利利。
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血清的主要成分
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生 长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。主要是：
第一:血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难；
第二:血清都是批量生产，各批量之间差异很大，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；
第三:不能排除血清中含有易变物质，这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。
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血清储存以及解冻注意事项
1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃ 至- 70℃ 低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间切勿超过一个月，由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱，必须预留定体积空间（强调），否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。、
2、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃ 至 -70℃ 血清低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室温或者可以置于37℃水浴中，不断摇动待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与血清成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
若一次无法用完一瓶，无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
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血清化冻为什么是浑浊的？
血清制备过程中会保留部分纤维蛋白原，化冻过程中纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，使血清中出现浑浊，絮状物。这种情况不影响血清的功效。血清化冻过程中，在37℃水浴中放置时间过长，也会导致沉淀产生，沉淀物包含磷酸钙结晶。沉淀物也不影响血清功效。
去除方法：可以将血清分装至无菌离心管内，以400g 稍微离心，将上清液加入培养基内一起过滤。也可直接过滤血清以去除这些絮状物。
v 血清热灭活（除非必须，一般不建议作此热处理）
1、血清为何要灭活
血清热灭活是将血清置于56℃水浴至完全解冻。可灭活其中补体系统中具有蛋白酶活性的成分。补体是免疫系统的成分。对于那些培养困难的细胞、用于病毒检测的细胞、用于细胞毒性检测很重要，可避免补体带来的不利影响。单热灭活也破坏血清中的生长因子，所以除非必需，血清才灭活处理。
启动的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究、培养ES 细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
2、血清灭活的正确方法
(1) 按照前面的介绍正确化冻
(2) 水浴预热56℃。水量要足够，水深要超过瓶中血清的高度。
(3) 轻轻摇动已解冻的血清，置于水浴中，水位可能会下降。
(4) 待水温重新到56℃时，再计时30分钟。
(5) 从水浴中拿出血清，待冷却。-20/-70℃存放。
目前市面上的血清产品五花八门，各种品牌宣称来自各个血源地，让人眼花缭乱。可以确定的是，除了所谓的“水货”，它们当中绝大多数都是质量合格的产品。但合格不一定好用，或者说适用于某一种细胞。要确定一款血清的性能，或者从众多血清来源中挑选一款，较好的的办法就是筛选验证。
血清的筛选验证主要包括：形态验证、增殖能力测试和克隆形成能力测试。我们通过多次传代，分辨同细胞、同代次、不同血清样品培养的细胞形态间的细微差异；或者同血清样品、不同细胞、不同代次间，细胞形态维持的情况。我们通过同一细胞多次传代，每代接种相同细胞量，间隔相同时间后计数得到单位时间倍增数，确定增殖性能。又通过不同细胞在相同培养面积内接种相同的少量的细胞，根据形成的单克隆数量、大小，判断血清支持克隆形成的能力。
一款血清需要综合达到这几个性能的高水平表现，才能称为好血清。最适合的才是使用最好的血清。
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森贝伽生物科技主营细胞培养类、动物血制品、病理染色液、蛋白与免疫、常规溶液等。在2018年创立了主打自主研发和生产的子品牌BioChannel，并成功推出了明星产品胎牛血清、动物血制品、DMEM（高糖）培养基、1640培养基、DMEM/F12培养基等，备受市场欢迎。陆续推出的新产品如支原体清除试剂、培养基等，也广受客户肯定。
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