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人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化培养基(即用型)
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  • 人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化培养基(即用型)

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BC-ZY-M-004-100mL

人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化培养基(即用型)

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    • 商品名称: 人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化培养基(即用型)
    • 商品编号: BC-ZY-M-004-100mL
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    【规格】 3个月

    【产品组分】

    试剂盒组分

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    成软骨诱导分化培养基

    100mL

    2-8℃

    3个月

    成软骨诱导液

    1mL

    -20℃

    12个月

    阿利新蓝染色液

    5mL

    2-8℃

    12个月

    使用前需将成软骨诱导液加入诱导分化培养基中,建议现用现配,当天用完。

    【产品简介】

    本品为人脐带间充质干细胞专用成软骨诱导分化培养基,根据脐带间充质干细胞独特生物学特性,优化诱导分化试剂配比与培养体系,调控细胞定向分化进程,有效提升人脐带间充质干细胞软骨诱导分化效率、分化稳定性及成熟程度,软骨形成效果优异,重复性好。

    【使用方法】 

    一、成软骨诱导分化(平面操作)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞,胰酶消化计数后,采用成软骨诱导分化培养基重悬细胞,离心调整细胞浓度至 1.0~2.0×10⁷ cells/mL。

    吸取 20 μL 细胞悬液(约 2.0-4.0×10⁵个细胞)悬滴于 24 孔板中央,置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 2-3 h,使细胞稳定贴壁。待细胞贴壁后每孔补充 1 mL 成软骨诱导培养基,常规培养;每 2-3 d 更换新鲜诱导液,持续诱导 21-28 d,观察细胞形态变化。

    2.染色鉴定

    细胞固定弃去孔内培养液,1×PBS 轻柔洗涤细胞 1 次;加入 4% 中性甲醛完全覆盖孔底,室温固定 15-30 min。固定完成后弃去固定液,1×PBS 洗涤细胞 2 次。

    向孔内加入适量阿利新蓝染色液,室温避光孵育染色 15-30 min。染色结束后弃去染液,PBS 漂洗 2 次,保留少量 PBS 浸润细胞,防止样本干燥干裂。

    诱导评估显微镜下采集染色图像,分析软骨分化效果。分化阳性细胞胞外酸性粘多糖可被特异性染为蓝绿色,以此评价成软骨分化程度。

    二、成软骨诱导分化操作(三维培养)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞消化计数,吸取 3×10⁵个细胞移入 15 mL 离心管,250 g 离心 4 min。弃上清后加入 0.5 mL 成软骨诱导预混液重悬细胞,150 g 离心 5 min;轻柔弃上清,再次加入 0.5 mL 成软骨诱导液重悬细胞,150 g 离心 5 min。离心管盖微微拧松,置于 37℃、5% CO₂恒温培养环境静置培养。

    培养 24 h 后观察细胞团聚集状态,轻柔拨动管底使细胞团脱离管壁,完全浸没于诱导培养基中。持续培养 21 -28 d 左右,每 2-3 d 更换一次新鲜无菌诱导液,根据细胞球形态、圆润光滑程度确定诱导终止时间,后续开展染色检测。

    2.染色鉴定

    将软骨球转移至 EP 管,PBS 清洗 2 次,加入适量 4% 中性甲醛溶液充分固定组织样本。 石蜡包埋切片固定后的软骨球常规脱水透明,经石蜡包埋后制作连续病理切片。

    石蜡切片依次脱蜡、梯度脱水,加入阿利新蓝染液室温染色15- 30 min;自来水冲洗 2 min,蒸馏水漂洗 1 次终止染色。

    诱导评估光学显微镜下观察染色结果并采集图像。

    【注意事项】

    1.本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗;

    2. 完全培养基注意避光冷藏保存,必须在保质期内用完。

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    使用前需将成软骨诱导液加入诱导分化培养基中,建议现用现配,当天用完。

    【产品简介】

    本品为人脐带间充质干细胞专用成软骨诱导分化培养基,根据脐带间充质干细胞独特生物学特性,优化诱导分化试剂配比与培养体系,调控细胞定向分化进程,有效提升人脐带间充质干细胞软骨诱导分化效率、分化稳定性及成熟程度,软骨形成效果优异,重复性好。

    【使用方法】 

    一、成软骨诱导分化(平面操作)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞,胰酶消化计数后,采用成软骨诱导分化培养基重悬细胞,离心调整细胞浓度至 1.0~2.0×10⁷ cells/mL。

    吸取 20 μL 细胞悬液(约 2.0-4.0×10⁵个细胞)悬滴于 24 孔板中央,置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 2-3 h,使细胞稳定贴壁。待细胞贴壁后每孔补充 1 mL 成软骨诱导培养基,常规培养;每 2-3 d 更换新鲜诱导液,持续诱导 21-28 d,观察细胞形态变化。

    2.染色鉴定

    细胞固定弃去孔内培养液,1×PBS 轻柔洗涤细胞 1 次;加入 4% 中性甲醛完全覆盖孔底,室温固定 15-30 min。固定完成后弃去固定液,1×PBS 洗涤细胞 2 次。

    向孔内加入适量阿利新蓝染色液,室温避光孵育染色 15-30 min。染色结束后弃去染液,PBS 漂洗 2 次,保留少量 PBS 浸润细胞,防止样本干燥干裂。

    诱导评估显微镜下采集染色图像,分析软骨分化效果。分化阳性细胞胞外酸性粘多糖可被特异性染为蓝绿色,以此评价成软骨分化程度。

    二、成软骨诱导分化操作(三维培养)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞消化计数,吸取 3×10⁵个细胞移入 15 mL 离心管,250 g 离心 4 min。弃上清后加入 0.5 mL 成软骨诱导预混液重悬细胞,150 g 离心 5 min;轻柔弃上清,再次加入 0.5 mL 成软骨诱导液重悬细胞,150 g 离心 5 min。离心管盖微微拧松,置于 37℃、5% CO₂恒温培养环境静置培养。

    培养 24 h 后观察细胞团聚集状态,轻柔拨动管底使细胞团脱离管壁,完全浸没于诱导培养基中。持续培养 21 -28 d 左右,每 2-3 d 更换一次新鲜无菌诱导液,根据细胞球形态、圆润光滑程度确定诱导终止时间,后续开展染色检测。

    2.染色鉴定

    将软骨球转移至 EP 管,PBS 清洗 2 次,加入适量 4% 中性甲醛溶液充分固定组织样本。 石蜡包埋切片固定后的软骨球常规脱水透明,经石蜡包埋后制作连续病理切片。

    石蜡切片依次脱蜡、梯度脱水,加入阿利新蓝染液室温染色15- 30 min;自来水冲洗 2 min,蒸馏水漂洗 1 次终止染色。

    诱导评估光学显微镜下观察染色结果并采集图像。

    【注意事项】

    1.本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗;

    2. 完全培养基注意避光冷藏保存,必须在保质期内用完。

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完全培养基

完全培养基

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    1mL

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    5mL

    2-8℃

    12个月

    使用前需将成软骨诱导液加入诱导分化培养基中,建议现用现配,当天用完。

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    本品为人脐带间充质干细胞专用成软骨诱导分化培养基,根据脐带间充质干细胞独特生物学特性,优化诱导分化试剂配比与培养体系,调控细胞定向分化进程,有效提升人脐带间充质干细胞软骨诱导分化效率、分化稳定性及成熟程度,软骨形成效果优异,重复性好。

    【使用方法】 

    一、成软骨诱导分化(平面操作)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞,胰酶消化计数后,采用成软骨诱导分化培养基重悬细胞,离心调整细胞浓度至 1.0~2.0×10⁷ cells/mL。

    吸取 20 μL 细胞悬液(约 2.0-4.0×10⁵个细胞)悬滴于 24 孔板中央,置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 2-3 h,使细胞稳定贴壁。待细胞贴壁后每孔补充 1 mL 成软骨诱导培养基,常规培养;每 2-3 d 更换新鲜诱导液,持续诱导 21-28 d,观察细胞形态变化。

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    细胞固定弃去孔内培养液,1×PBS 轻柔洗涤细胞 1 次;加入 4% 中性甲醛完全覆盖孔底,室温固定 15-30 min。固定完成后弃去固定液,1×PBS 洗涤细胞 2 次。

    向孔内加入适量阿利新蓝染色液,室温避光孵育染色 15-30 min。染色结束后弃去染液,PBS 漂洗 2 次,保留少量 PBS 浸润细胞,防止样本干燥干裂。

    诱导评估显微镜下采集染色图像,分析软骨分化效果。分化阳性细胞胞外酸性粘多糖可被特异性染为蓝绿色,以此评价成软骨分化程度。

    二、成软骨诱导分化操作(三维培养)

    1.诱导分化

    取对数生长期细胞消化计数,吸取 3×10⁵个细胞移入 15 mL 离心管,250 g 离心 4 min。弃上清后加入 0.5 mL 成软骨诱导预混液重悬细胞,150 g 离心 5 min;轻柔弃上清,再次加入 0.5 mL 成软骨诱导液重悬细胞,150 g 离心 5 min。离心管盖微微拧松,置于 37℃、5% CO₂恒温培养环境静置培养。

    培养 24 h 后观察细胞团聚集状态,轻柔拨动管底使细胞团脱离管壁,完全浸没于诱导培养基中。持续培养 21 -28 d 左右,每 2-3 d 更换一次新鲜无菌诱导液,根据细胞球形态、圆润光滑程度确定诱导终止时间,后续开展染色检测。

    2.染色鉴定

    将软骨球转移至 EP 管,PBS 清洗 2 次,加入适量 4% 中性甲醛溶液充分固定组织样本。 石蜡包埋切片固定后的软骨球常规脱水透明,经石蜡包埋后制作连续病理切片。

    石蜡切片依次脱蜡、梯度脱水,加入阿利新蓝染液室温染色15- 30 min;自来水冲洗 2 min,蒸馏水漂洗 1 次终止染色。

    诱导评估光学显微镜下观察染色结果并采集图像。

    【注意事项】

    1.本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗;

    2. 完全培养基注意避光冷藏保存,必须在保质期内用完。

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