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Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)
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  • Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)

编号 :

BI-WB019

Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)

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  • 产品描述
  • 适用范围
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  • 参考文献
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    • 商品名称: Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)
    • 商品编号: BI-WB019
    • 货号(表格): BI-WB019
    • 价格(表格): 200
    • 规格: 100mL
    • 规格(表格,必填): 100mL
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    • 有效期: 12个月

    【货号】 BI-WB019

    【规格】 100mL

    【保存】 -20℃ , 12 个月。

    【产品简介】

    WesternIP细胞裂解液(含抑制剂)是一种常用的细胞组织快速裂解液,主要成分为20mM TrispH7.5  150mM NaCl  1% Triton X-100  以及焦磷酸钠, β-甘油磷酸钠, EDTA ,正钒酸钠,亮肽素等多种抑制剂。WesternIP细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WB IP co-IP

    【使用方法】

    一、对于培养细胞样品:

    (一)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (二)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2s后,细胞就会被裂解。

    (三)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加100~200μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~ 100万细胞/管,然后再裂解。

    (四) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液即可,但如果细胞密度非常高可以适当加量到150μL200μL 。每100万细胞用100μL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2~4mg/mL ,不同细胞有所不同。

    二、对于组织样品:

    (一)把组织剪切成细小的碎片。

     

    (二)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (三)按照每20mg组织加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

    (四)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    (五) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15~25mg/mL ,不同状态的不同组织有所不同。

    (六)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    【注意事项】

    1 、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    2 、对于某些特殊蛋白的IP ,若WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试RIPA裂解液(强、 中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的时候背景很高,则应考虑选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中) 。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

    3 、对于某些难溶解蛋白的Western ,如果发现WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。

    4 、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    5 、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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    【保存】 -20℃ , 12 个月。

    【产品简介】

    WesternIP细胞裂解液(含抑制剂)是一种常用的细胞组织快速裂解液,主要成分为20mM TrispH7.5  150mM NaCl  1% Triton X-100  以及焦磷酸钠, β-甘油磷酸钠, EDTA ,正钒酸钠,亮肽素等多种抑制剂。WesternIP细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WB IP co-IP

    【使用方法】

    一、对于培养细胞样品:

    (一)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (二)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2s后,细胞就会被裂解。

    (三)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加100~200μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~ 100万细胞/管,然后再裂解。

    (四) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液即可,但如果细胞密度非常高可以适当加量到150μL200μL 。每100万细胞用100μL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2~4mg/mL ,不同细胞有所不同。

    二、对于组织样品:

    (一)把组织剪切成细小的碎片。

     

    (二)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (三)按照每20mg组织加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

    (四)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    (五) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15~25mg/mL ,不同状态的不同组织有所不同。

    (六)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    【注意事项】

    1 、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    2 、对于某些特殊蛋白的IP ,若WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试RIPA裂解液(强、 中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的时候背景很高,则应考虑选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中) 。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

    3 、对于某些难溶解蛋白的Western ,如果发现WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。

    4 、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    5 、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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    【规格】 100mL

    【保存】 -20℃ , 12 个月。

    【产品简介】

    WesternIP细胞裂解液(含抑制剂)是一种常用的细胞组织快速裂解液,主要成分为20mM TrispH7.5  150mM NaCl  1% Triton X-100  以及焦磷酸钠, β-甘油磷酸钠, EDTA ,正钒酸钠,亮肽素等多种抑制剂。WesternIP细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WB IP co-IP

    【使用方法】

    一、对于培养细胞样品:

    (一)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (二)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2s后,细胞就会被裂解。

    (三)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加100~200μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~ 100万细胞/管,然后再裂解。

    (四) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液即可,但如果细胞密度非常高可以适当加量到150μL200μL 。每100万细胞用100μL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2~4mg/mL ,不同细胞有所不同。

    二、对于组织样品:

    (一)把组织剪切成细小的碎片。

     

    (二)融解WesternIP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。

    (三)按照每20mg组织加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

    (四)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    (五) 充分裂解后  10000~ 14000g离心3~5min ,取上清, 即可进行后续的PAGE  Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15~25mg/mL ,不同状态的不同组织有所不同。

    (六)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    【注意事项】

    1 、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    2 、对于某些特殊蛋白的IP ,若WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试RIPA裂解液(强、 中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的时候背景很高,则应考虑选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中) 。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

    3 、对于某些难溶解蛋白的Western ,如果发现WesternIP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。

    4 、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

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