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人弥漫大B淋巴瘤细胞 U2932

价格

¥ 2800

  • 规格
    • 1×10⁶cells/T25瓶

所属分类:

货  号:

BC-C-HU-172

货  期:

两周

存储条件:

液氮保存

有  效  期:

长期

  • 产品描述
  • 参考文献
    • 商品名称: 人弥漫大B淋巴瘤细胞 U2932
    • 商品编号: BC-C-HU-172
    • 货号(表格): BC-C-HU-172
    • 价格(表格): 2800
    • 规格: 1×10⁶
    • 规格(表格,必填): 1×10⁶
    • 货期: 两周
    • 储存条件: 液氮保存
    • 有效期: 长期

    【货号】 BC-C-HU-172

    【规格】 1*106个/T25培养瓶(或冻存管)

    【保存】 液氮保存,长期

    【产品介绍】

     

    英文名称

    U2932

    中文名称

    人弥漫大B淋巴瘤细胞

    种属

    人源

    组织来源

    B细胞

    生长特性

    悬浮生长

    细胞形态

    淋巴母细胞样,圆形,单个细胞,少数聚团

    传代比例

    1:2-1:4

    换液频率

    2~3/周

    培养体系

    RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

    培养条件

    5% CO2 ;37℃

    冻存条件

    冻存液:90%FBS+10%DMSO;液氮中长期保存。

    生物安全等级

    1级

    【操作步骤】

    【细胞复苏】

    1、取出1mL冻存管后,迅速放入37℃水浴锅中不断摇晃使其解冻,直至冻存管中无结晶(此过程尽量在2min内完成);

    2、准备15mL离心管,加入2-6mL完培,将冻存管中的细胞悬液移至离心管,1000 rpm离心3~5min;(比较难养的细胞可适量增加离心管中的完培)

    3、吸弃上清,用新鲜培养基重悬细胞,接种至无菌的培养器皿中,轻晃动混匀后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

    注:复苏第二天若细胞状态较好,但漂浮碎片较多可做换液处理;

    复苏的细胞需要时间恢复状态,当复苏好后密度低于80%时,2天内暂时不要换液,细胞生长状态恢复后再进行后续传代等操作;

    【细胞传代】

    当细胞汇合度达到80%-90%,即可传代培养。

    收集细胞:贴壁细胞可以参考以下方法1、吸去培养液,加入不含钙镁的PBS,轻轻润洗瓶底1-2次,吸弃PBS;2、加入0.25%胰酶-EDTA消化液(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),铺匀瓶底放入培养箱中消化1-2min;(部分细胞贴壁较牢,可采用分步消化:将消化下来的细胞转移至离心管终止,在培养瓶中加入胰酶继续消化,直至大部分细胞脱落)3、倒置显微镜下观察大部分细胞变圆脱落,迅速加入完全培养基终止消化,完培与胰酶比例为2:1;4、轻轻吹打细胞后吸出转移至离心管中。半贴壁半悬浮细胞需先收集悬液至离心管再参考贴壁细胞操作。

    离心:收集好的细胞在1000rpm条件下离心3~5min,离心好后弃除上清液。

    接种:准备好新的培养瓶并添加适量完全培养基,在离心管加入1-2mL完全培养基重悬吹打均匀,初次传代将细胞悬液按1:2比例接种到新的培养瓶中,后续可根据细胞实际情况按1:2-1:4的比例传代;接种完成后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

    悬浮细胞建议采用半换液传代:将培养瓶站立静置5-10min,肉眼可见细胞沉底,吸取1/2~2/3上清至离心管离心,将瓶内剩余悬液按1:2或1:3的比例转移至新的培养瓶,将离心管中的细胞重悬后放入培养瓶添加新鲜完全培养基即可。

    【细胞冻存】

    收集细胞参考细胞传代步骤。

    冻存液重悬:细胞按照传代步骤收集细胞至离心管并计数,根据计数的密度决定细胞冻存数量,一般推荐细胞冻存密度为1×106-1×107个活细胞/管。离心后弃上清,加入配制好的冻存液重悬,分配到冻存管中,每管1mL。

    冻存:将冻存管放入程序降温盒中进行梯度降温,然后放入-80℃冰箱降温,24h后将冻存管转入液氮罐中。若没有冻存盒,可于冰箱4℃放置30min,随后转移至-20℃冷冻2h,接下来将其放于-80℃超低温冰箱中过夜,最终放置于液氮中以长期保存。

    【注意事项】

    (1)所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全柜内操作,并注意防护。所有废液及接触过此细胞的器皿需灭菌后方能丢弃。

    (2)若细胞在操作过程中发生污染,需对污染的细胞进行灭活方可丢弃。

    (3)本库的细胞系(株)仅用于科研工作,未经许可不得用于其他目的,使用者不得将本库细胞系(株)转让给第三者。

    (4)细胞到货后建议在前3代时冻存一批细胞种子以备后续用。

关键词:

人弥漫大B淋巴瘤细胞 U2932

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