如何应对细胞复苏不贴壁问题

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冻存的细胞总是受损？复苏的细胞存活率低？什么时候适合冻存细胞？复苏细胞有什么要注意的？应对细胞复苏问题我们有妙招！

很多科研人会遇到细胞虽然是活细胞但是不贴壁的情况，这个情况其实很大可能就是冻存操作和复苏操作的细节出了差错。而要保证细胞冻存和复苏不受伤害关键密宝是“慢冻快融”。

什么是“慢冻快融”

慢冻：这一步骤主要是为了防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，从而对细胞造成损害。通过缓慢降低温度，细胞可以逐步脱水，减少胞内冰晶的形成，从而保护细胞结构不受破坏。此外，加入低温保护剂（如DMSO）也能提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，进一步减少冰晶对细胞的损伤。

速融：在复苏过程中，快速融化是必要的，以防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用。快速融化能使细胞迅速进入复苏和生长状态，避免由于缓慢融化导致的水分渗入细胞内形成胞内再结晶，从而对细胞造成损伤。

冻存避坑指南

复苏操作技巧

复苏后注意事项

细胞复苏后只有非常少量细胞贴壁，是不是需要重新复苏？先不要着急丢掉！可以补加血清和细胞因子，或者每隔 2-3 天换新鲜的生长培养基，经过 2-3 次换液后，大部分细胞就能看到明显增殖，此时再按照正常传代操作即可。

细胞复苏后刚开始已经贴壁了状态不错，后面第二天开始出现死亡现象，这个情况可能是冻存前细胞消化过度，或者冻存中收冻存液杀害细胞凋亡导致的情况。

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