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07
2024
-
06
人脂肪间充质干细胞的分离培养
作者：
脂肪干细胞（ADSCs）是一类来源于脂肪组织的间充质干细胞，具有自我更新与多种分化潜能，通过分离培养可以在体外稳定增殖，在特定的诱导条件下，可以被分化诱导为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞等。
（图片来源于网络）
- ADSCs细胞组织获取
根据分布位置可以将人体脂肪分为内脏脂肪和皮下脂肪两种形式，通常情况下，皮下脂肪约占人体总脂肪量的85％，内脏脂肪占15％。目前，ADSCs主要通过局部脂肪切除术及抽脂术后的脂肪组织中获取，有学者认为供者组织状态及年龄等也是影响细胞活性的重要因素，通常情况下，供者状态越佳，细胞增殖效果越好。
- ADSCs细胞分离
目前常用的是组织酶消化法，将脂肪组织剪碎后采用胶原酶或胰酶消化、过滤离心后，使用含血清的培养基将沉淀重悬后接种于培养瓶中。分离过程中需注意要将脂肪层面上的多余组织和血管去除干净，为保证酶消化效果，脂肪尽可能剪碎，在用PBS反复冲洗，以确保红细胞去除干净。
- ADSCs细胞培养
将细胞沉淀在含20% 胎牛血清的DMEM/F12培养基中混匀，接种在6孔板或培养瓶中，置于37℃，5% Co2培养箱中培养，待观察到细胞贴壁一定密度后进行首次换液，换液前可对细胞进行清洗一次，在加入新培养液。待细胞生长至80% 融合时进行消化传代。
- ADSCs细胞流式检测
可取状态良好的细胞以0.25％胰酶消化成细胞悬液，离心收集细胞沉淀，用0.3％ Triton X-100溶液作用30min后PBS冲洗2次，将其分为2组，同型对照组加非特异性IgG，阳性组加CD13抗体，上流式细胞仪进行检测。
DSCs细胞冻存
干细胞在长期培养传代易受到微生物污染、基因型改变、细胞形态异变等情况的影响，而ADSCs在体外长期培养中随着传代次数的增加，容易自发分化，而失去多向分化能力，需要对其进行程序降温后液氮保存。
- ADSCs细胞临床作用
ADSCs具有取材方便、易培养、分化潜能大，可在体外稳定增殖传代等特点，成为干细胞领域的新热点，其研究应用的领域可涉及到组织工程、心血管疾病、代谢性疾病、关节炎性疾病等多个方面。
[参考文献]：
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Fan Ying, Du Zhenwu, Zhang Yucheng,Zhang Guizhen,Iso lation，cultivation and identification of adult ad iposederived stem cells.
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