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07

2024

-

06

原代细胞与细胞系的培养区别

作者:


首先我们需要区分原代细胞和细胞系的概念:

原代细胞(primary cell)是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞。

细胞系(cell line)是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

原代细胞培养之组织取材

原代细胞最接近和最能反映体内生长特性,适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。

部位

方法

 皮肤和黏膜

主要取皮片,面积一般2-4cm2

 

内脏和实体瘤

» 无菌环境;

» 熟悉所需组织的类型和部位;

» 要避开破溃、坏死、液化部分,以防污染、尽量去除混杂的结缔组织。

 

血液细胞

» 一般多抽取静脉外周血、或从淋巴组织中分离细胞;

» 取材时应注意抗凝。

骨髓、羊水、胸/腹水细胞

 

严格无菌、注意抗凝、还要尽快分离培养、离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。

 

 

动物组织取材-鼠胚组织

» 用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物;

» 将其浸泡在含75%酒精的烧杯中,5分钟后取出动物;

» 在消毒过得木板上可用无菌的图钉固定四肢,切开皮肤;

» 用无菌操作法解剖取胚。

动物组织取材-幼鼠胚肾/肺

 

» 幼鼠采用上述方法处死消毒后;

» 腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧;

» 采用无菌法打开胸腔取肺,或从背部打开腹腔取肾。

原代细胞的培养方法

组织块培养法:

将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

消化培养法:

该方法是源于消化分散法,将妨碍细胞生长的细胞间质(包括基质、纤维等)去除,使细胞分散形成细胞悬液,然后分瓶培养。

悬浮细胞培养法:

对于悬浮生长的细胞,如淋巴细胞、骨髓细胞、和免疫细胞等无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

器官培养:

从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,其特性仍保持原有器官细胞的组织结构和联系、并能存活。

注意事项:

注意事项

1. 培养液和培养物的比例:一定浓度的培养物仅能支持一定数量的细胞生长,不能盲目增加每单位体积的细胞浓度。

2. pH:初培养pH应为7.4,培养过程中应不低于7.0。

3. 培养瓶内的空间:一般培养瓶内培养液与液面上的空间体积之比为1:10。

细胞系培养

细胞系常见生长方式分为贴壁细胞和悬浮细胞

贴壁细胞

悬浮细胞

适合包括原代细胞在内的大多数细胞类型。

适用于已适应悬浮培养的细胞和其他一些无粘附性的细胞。

需要定期传代,但易于在倒置显微镜下进行目视检验。

较易传代,但需要每天进行细胞计数和存活率测定,以遵循生长方式;可将培养物稀释以刺激生长。

采用酶法或机械方法解离细胞。

无需通过酶法或机械方法解离细胞

细胞生长受到表面积限制,从而可能限制细胞产量。

细胞生长受到培养基中细胞浓度的限制,易于扩大规模培养

需要使用经过组织培养处理的容器。

可在未经组织培养处理的培养容器中进行培养,但需要搅动以便进行充分的气体交换

可连续收获产物,用于细胞学研究等多种研究应用

可批量收获产物,用于批量生产等多种研究应用

悬浮细胞传代步骤

直接传代法

1、待悬浮细胞长满至80%~90%(细胞悬液变黄),即可传代;

2、用吸管吸弃细胞悬液 1 /2~1 / 3;

3、加入适量的新鲜培养基,继续培养。

离心传代法(在发现有细胞碎片的情况下)

1、将细胞悬液转移到离心管内;

2、150 g 离心 5 min,弃去上层清液;

3、使用新鲜的培养基重悬细胞;吸管吸取适量细胞悬液,装入新的培养瓶,      再加入适量的新鲜培养基,继续培养。

贴壁细胞传代步骤

清洗—消化—终止—标记

 

 

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