3T3-L1细胞培养攻略

作者：

【细胞简介】

3T3-L1是从小鼠胚胎中分离出来的成纤维细胞，当3T3-L1细胞从快速分裂到长满接触抑制时，该细胞经过前脂肪向脂肪样逆转，该细胞可用于研究糖尿病、肥胖症等疾病。

【细胞特点】

英文名称	3T3-L1
中文名称	小鼠胚胎成纤维细胞
种属	鼠源
组织来源	小鼠胚胎
生长特性	贴壁生长
细胞形态	成纤维细胞样
传代比例	1:3-1:4
换液频率	2~3次/周
培养体系	RPMI-1640＋10% CS＋1% Glutamax +1% Sodium Pyruvate+1% Non-essential Amino Acids+1% P/S
培养条件	5% CO₂；37℃
冻存条件	冻存液：90%FBS+10%DMSO；液氮中长期保存。
生物安全等级	1级

【细胞培养建议】

1、该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%），森贝伽推荐使用1640培养基进行培养效果更好。

2、该细胞起始接种密度应在3000/c㎡，并且在细胞达到80%融合或者密度介于5万-6万/c㎡时传代，避免细胞完全融合。

3、3T3-L1这样具有脂滴的细胞培养过程中受到压力的表现出现空泡现象时正常的，原因可能是培养基中缺乏谷氨酰胺、添加了抗真菌剂、CO2浓度较低对培养基中碳酸氢钠的影响或者使用的血清品质较低培养基的营养消耗殆尽。

4、培养密度一般控制在40-80%的汇合度，过高的汇合度，细胞可能会开始分化。

【细胞常见问题】

1、3T3-L1细胞在分化过程中出现异常怎么办？

答：细胞密度是影响3T3-L1细胞分化的重要因素，过低或过高的细胞密度都会影响分化效果；密度一般控制在40-80%的汇合度，如果太低，则会影响细胞生长，如果太高，则会导致细胞死亡。

2、3T3-L1细胞传代后容易出现细胞老化的情况怎么办？

答：在进行传代时，需要注意细胞的消化过程，该细胞对胰酶比较敏感，添加胰酶后约1-2分钟内细胞会脱落，因此消化时间的把控极其重要，同时避免过度打碎细胞团，以保证细胞的生长和分化能力。

南京生航生物技术有限公司

地址：南京市江宁区天元东路2289号（江宁高新园）

邮编：211100