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23

2024

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02

生航生物:细胞复苏注意事项

作者:


环境准备

     春节假期不长,但是我们实验室在放假前就将细胞陆续冻存起来,培养箱关闭,对实验室进行过彻底的杀菌消毒。开工第一天我们首先也是要对实验室进行环境的消杀。

环境:用含有消毒试剂的纯水对洁净区四周墙面进行清洁,一般使用的消毒试剂为百毒杀、新吉尔灭,建议实验室多储备不同的消毒试剂交替使用。这样消毒灭菌效果更佳。

仪器设备:用酒精对洁净区所有设备进行擦拭清洁。水浴锅:将水浴锅里的水更换,内部底板和内壁进行清洁;离心机:洁净区离心机为落地式常温离心机,将离心机内壁用酒精进行擦拭,即可;CO,培养箱:用酒精对培养箱进行清洁,承液盘里的水进行更换。CO,瓶气体调到正确值;生物安全柜:用酒精擦拭生物安全柜内部,开紫外进行灭菌处理。

洁净区四周以及仪器设备擦拭完毕后,对洁净区紫外灭菌半小时。

 

​实验室环境进行消杀后,我们就可以开启细胞复苏了。

从液氮罐里取出我们所需细胞,用干冰暂时保存通过传递仓传递到细胞培养室。将需复苏细胞的名称、冻存时间、培养体系记录在实验记录本中。进行复苏操作。

1、实验准备:水浴锅设定37℃C恒温、将需要用到的仪器和试剂放入生物安全柜准备,细胞对应完培、血清、离心管、培养瓶、试管架、移液枪、枪头盒等。

2、将细胞冻存管用漂浮板固定放入水浴锅中水浴一分钟,期间轻微震荡保证冻存管受热均匀,并且观察管内细胞融化状态。细胞完全融化后喷酒精迅速转移至生物安全柜内。

3、将冻存管内液体(冻存液+细胞一般为1ml)用移液枪转移至离心管中,加入两倍的含有FBS的完培进行中和(一般提前将完培打入离心管准备好);这步中和操作一定要迅速。

 4、将离心管放入离心机1000R离心5分钟,离心后取上清,用细胞对应的完全培养液将细胞重悬打入培养瓶中即可。-般冻存的细胞量在1*106左右所以复苏细胞一般使用T25培养瓶培养。

5、细胞转入培养瓶后放入CO,培养箱进行培养第二天观察细胞复苏状态。

以上就是细胞房刚刚开工所做的一系列准备和细胞复苏过程,细胞复苏的第二天一定要观察细胞复苏状态,及时进行处理。

 

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