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05

2024

-

01

NCTC clone 929 细胞培养攻略

作者:


NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]

NCTC clone 929 [L-929,菌株L的衍生物](结缔小鼠组织)是菌株L的第一个克隆,在连续培养中建立的第一个细胞株之一。NCTC clone 929可用于细胞系毒性测试。

以下我们简称L929细胞。

L929,小鼠结缔组织L细胞株929克隆,又名NCTC clone 929,是细胞系L的克隆细胞株。细胞系L是最早建立的连续培养细胞系之一,取自一只100日龄的雄性C3H/An小鼠乳晕的正常皮下疏松结缔组织和脂肪组织。

【货号】 BC-C-MI-026

【规格】 1*106个/T25培养瓶(或冻存管)

【保存】 液氮保存,长期

【产品介绍】

英文名称

NCTC clone 929 (L-929)(STR鉴定正确)

中文名称

小鼠成纤维细胞(STR鉴定正确)

种属

鼠源

生长特性

贴壁生长

细胞形态

成纤维细胞样

细胞类型

自发永生化细胞

传代比例

1:3-1:4

换液频率

2~3次/周

培养体系

MEM(含NEAA)+10% HS+1% P/S

倍增时间

28-36 h

培养条件

5% CO2 ;37℃

冻存条件

冻存液:90%FBS+10%DMSO;液氮中长期保存。

生物安全等级

1级

 

【细胞培养常见注意事项】

通用注意事项:

建议细胞前三次传代中冻存部分细胞,后续遇到问题可重新复苏

部分细胞传代后细胞内出现黑色小点,细胞间隙内出现少量颗粒物或者培养基中浮游着少量死细胞等均为正常现象,对细胞的增殖及试验无影响。

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片,可以吸去细胞悬液后用PBS进行清洗;如若PBS清洗后未能清除的碎片,可以用胰酶消化细胞重新接种,如果碎片较多,建议用PBS多清洗几遍。

细胞贴壁较弱,消化时间偏短,注意控制消化时间。

细胞生长较快,注意及时换液及传代。

细胞传代处理后的第二天,在显微镜下观察细胞状态,如死细胞较多且细胞密度较低,需要进行换液操作,也可视情况稳定。

大多数细胞如果传代时胰酶消化处理不当,会造成极少部分细胞老化扁平变大,可在后续传代中组件凋亡,不用担心细胞整体老化变差;

L929细胞需要注意:

细胞简称为L929,细胞需要使用马血清培养,请不要擅自更换其他类型血清培养,若改用其他类型血清导致细胞形态异常则不予售后。

【L929细胞培养的问题】

  1. L929细胞可以使用胎牛血清培养吗?

不建议使用胎牛血清培养,虽然市面上有使用胎牛血清培养的体系,但不能保证细胞形态的正确性,以下是相关的验证结果:

 

 

 

 

 

               生航马血清                      其他品牌马血清                           胎牛血清

ATCC的L929细胞形态

其中细胞状态对比:

①可见胎牛只有少量圆形漂浮细胞,细胞状态饱满,铺路石形态;

②马血清培养细胞相对来说细胞形态为长梭形带触角,与ATCC形态更为贴近;

综上所述,不建议使用胎牛血清培养,虽然细胞形态更为饱满,但整体形态发生改变,目前不明确是否会对细胞的功能性毒性实验产生影响。

 

  1. 此细胞冻存时候为何是 使用胎牛血清冻存,会不会对细胞有影响?

此细胞冻存时最好使用胎牛血清冻存,跟大多数细胞一样,需要90%胎牛血清和10%的DMSO,细胞复苏时按正常操作,清洗细胞去除DMSO和胎牛血清,并不会影响细胞的培养。

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