新闻中心
News Center
了解生航实时动态
03
2023
-
08
Biochannel原代提取培养小课堂
作者：
原代细胞
一般是指机体的组织经过蛋白酶消化或者是其他的方法获得单个细胞并在体外镜下模拟机体培养的细胞，我们统称为原代细胞。
原代细胞的培养相较于细胞系的培养要更加繁琐和复杂化操作，同时也会更容易出现细胞的分化老化以及死亡和杂细胞污染等等情况，但是由于课题的选择不同，我们需要选择进行原代细胞提取培养时我们就需要逐步摸索出原代细胞最好的提取方法，Biochannel特地针对原代细胞的提取乃至培养做了一系列的实验，致力于为大家的科研之路铺路搭桥。
准备工作
1、将豚鼠处死后浸泡在75%的乙醇中进行小鼠表皮消毒，时间控制在5min左右；
2、提前配置1%P/S的PBS或Hank’s溶液作为清洗溶液；
3、胰蛋白酶、D/F12培养基水浴锅中37℃预热。
原代提取
1、取出豚鼠肾脏
2、将1%双抗的PBS倒入培养皿中，清洗掉肾脏表面包裹的油脂
3、继续使用1%双抗的PBS进行清洗，尽可能的将其表面油脂清洗干净，一般重复清洗三次。
4、把胰酶倒入培养皿中，用剪刀将肾脏在胰酶中剪碎（或研磨器），剪成肉泥状最佳
5、转移至新的50mIEP管中，后将胰酶倒入其中，一般5-6倍的胰酶，37°C消化45min-60min，每5min进行震荡一次
6、先把培养基(D/F12) 倒入新的50ml离心管中，再将胰酶混悬液通过细胞筛过筛入培养基中
7、将其混匀之后用1000rpm离心5min，弃去上清，用5ml完全培养基重悬至T25瓶中放置在培养箱中培养，次日观察是否有细胞贴壁。
细胞培养过程
细胞过筛分离为单个细胞后，采用生航的DMEM/F12培养基和生航的特级胎牛血清配制成的完全培养基（DMEM/F12+10%FBS）培养，在二氧化碳培养箱放置平衡到第三天后，有明显的贴壁细胞呈现：
细胞在培养至第五天，传代一次，更换为生航的DMEM高糖和10%的生航特级胎牛血清继续培养，细胞生长状态良好。
关注公众号
