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13

2023

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07

BCA蛋白定量试剂盒(增强型)

作者:


【货号】 BI-WB005

【规格】 200T / 250T / 500T+1mL BSA / 2500T / 5000T /B (蛋白标准品(5mg/mL))

【保存】整套试剂室温保存,12个月。蛋白标准溶液室温保存,一个月;2~8℃,12个月;-20℃可长期保存。

【产品组成】

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【产品简介】

BCA蛋白定量是最常用的蛋白浓度检测方法,其与传统方法相比,更简单、更稳定、更灵敏度。BCA法测定蛋白浓度受其他成分影响小,对于5%以内的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80均具有很好的兼容性,但易受螯合剂、高浓度的还原剂等的影响。所以,在BCA法测定蛋白浓度前应使蛋白溶液中的EDTA浓度≤10mM,DTT浓度≤1mM,2-ME≤0.01%。

BCA蛋白定量试剂盒在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系,其最小检出量为25μg/ml。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

【使用方法】

1、取1ml蛋白标准配制液完全加入到含有20mg的蛋白标准(BSA)中,充分溶解,后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液,配制后可立即使用,配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。

2、取适量的5mg/ml蛋白标准溶液,稀释至终浓度为500μg/ml或所需浓度。如取100μl 5mg/ml蛋白标准,加入900μl稀释液,充分混匀,即配制成500μg/ml蛋白标准溶液。

3、根据样品数量,按试剂(A):试剂(B)=50:1的比例配制BCA工作液,即取50份BCA试剂A和1份BCA试剂B,充分混匀,即获得BCA工作液。例如取5mlBCA试剂A和0.1ml BCA试剂B,配制成5.1ml BCA工作液,BCA工作液室温24h内稳定。

4、将500μg/ml蛋白标准溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中,加稀释液补足至20μl,其蛋白标准浓度依次为0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。

5、加20μl待测蛋白到96孔板或EP管中,如果样本不足20μl,用稀释液补足至20μl。注意:如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液不同,应在待测蛋白中加入20μl稀释液;如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同,无需在待测蛋室温白样本孔中加入20μl稀释液,以减少不同溶液的差异。

6、各孔或管加入200μl配制好的BCA工作液,37℃孵育20~30min。

7、酶标仪或分光光度计测定562nm波长处吸光度(如无562nm,540~595nm之间的波长也可),各孔或管吸光度减去用未加500μg/ml蛋白标准溶液的吸光度,以求得的差值为纵坐标,以标准孔或管中蛋白浓度(μg/ml)为横坐标,得出标准曲线及回归方程,根据标准曲线计算出待测样品的蛋白浓度。

【注意事项】

1、如果检测效果不佳,可以室温放置2h或60℃放置30min,颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快;如果浓度较低,可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。

2、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化,可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。

3、BCA法检测中样本中不应含有EDTA,否则影响检测结果。

4、因BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,建议每次测定时都做标准曲线,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则每次都做标准曲线。

5、如果没有酶标仪,也可以使用普通分光光度计测定,但应考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应按比例放大;使用分光光度计测定蛋白浓度时,可以测定的样品数量可能会显著减少。

6、为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当加热,但是切勿过热,否则易失效。

7、为保证蛋白的精确定量,样品的提取和标准蛋白的配制选用相同的缓冲液,同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值,建议使用其他的方法测定。

8、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

9、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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