%{tishi_zhanwei}%

新闻中心

News Center


了解生航实时动态


04

2023

-

07

细胞复苏注意事项

作者:


细胞复苏的第一要点就是快速融化,要尽可能快地将细胞从-178℃解冻至37℃,尽可能避免冰晶缓慢融化时进入细胞再形成结晶,对细胞造成损伤。

具体操作流程共有八个步骤:

① 操作准备

1) 将无菌超纯水加热至37℃保存在无菌玻璃瓶中备用;

2) 细胞实验室预先常规消杀,用紫外线照射30min以上,并用75%酒精擦拭超净台以及各类器材,保证操作环境无菌;

3) 将各类需要使用的枪头、离心管、培养瓶以及废液缸等高温高压灭菌后有序摆放在超净台桌面。

② 细胞转移

1) 根据细胞冻存时保存的编号确定细胞存放的位置;

2) 穿好防护设备后将细胞从液氮中取出,核对细胞编号;

3) 将细胞迅速转移至操作空间,如步行距离超过1min,需准备干冰运输。

③ 细胞解冻

1) 迅速将细胞冻存管投入37℃的无菌超纯水中快速摇晃解冻;

2) 解冻1-2min后等液体完全溶解后,用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再放入超净台内。

④ 离心清洗

1) 将细胞溶液加入完全培养基完全吹打混合后平衡;

2) 将离心管以3000r/min,离心3min,重复清洗两次去除DMSO。

⑤ 悬液制作

1) 将上清液弃去后重新加入10ml完全培养基;

2) 通过移液枪完全吹打混合后制成细胞悬液。

⑥ 计数观察

1) 取适量悬液进行染色计数,计算细胞活力、活率;

2) 显微镜下观察细胞,确定细胞具体复苏情况

3) 细胞浓度需保持在5*105为适宜。

⑦ 培养细胞

1) 将观察过后适宜培养的细胞分装在各个培养瓶中;

2) 将各个培养瓶标记后放入37℃,5%CO2培养箱内24-48h后换液或传代。

⑧ 记录时间

1) 将培养瓶中的细胞记录时间,方便之后换液传代记录。

细胞复苏小贴士TIPS:

1. 操作液氮时需要做好完全防护措施,避免直接接触到液氮造成伤害。

2. 取出冻存管后需要检查是否密封,如果密封不完全会导致液氮进入管内解冻时出现炸管情况。

3. DMSO在常温下会对细胞产生毒性,解冻要迅速,解冻后需要尽快加入少许培养基稀释后离心。

4. 每次移液后需要更换枪头,避免造成溶液交叉污染。

5. 解冻前后的培养基血清需要保持一致,如有更换需要进行梯度更换。

判断细胞复苏的成功的关键,就是看细胞复苏后的存活率以及之后的生长情况,以贴壁细胞为例,复苏后细胞贴壁率能达到95%以上,就说明细胞活性好,复苏操作流程达标。

相信大家有了本文的学习与巩固,一定能更快的成为一名合格的细胞培育达人!

相关新闻

实验相关 | 细胞转染试剂怎么选?

2024-04-12

生航生物:细胞培养攻略——HK-2

2024-04-03

新细胞推荐——MIN6

2024-03-22

开学啦,这些细胞常见问题你遇到了吗?

2024-03-14