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30

2023

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06

B16-F10(小鼠皮肤黑色素瘤细胞)细胞培养建议

作者:


英文名称:B16-F10

中文名称:小鼠皮肤黑色素瘤细胞

种 属:鼠源

组织来源:器官;皮肤;品系:C57BL/6J;疾病;黑色素瘤

生长特性:贴壁生长

细胞形态:梭形细胞样;上皮细胞样

传代比例:1:2 ~ 1:4

换液频率:2~3次/周

倍增时间:48-72h

培养体系:DMEM(高糖)+10%FBS+1%P/S

培养条件:5%CO2;37 ℃

冻存条件:Biochannel细胞冻存液,程序降温,液氮长期保存。

【细胞培养特点】

 

1. 该细胞在DMEM(含1.5g/L NaHCO3)培养基中生长良好,大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/LNaHCO3)培养基培养细胞时需要提高CO2浓度(7%-10%)。

2. 该细胞我们推荐的基础培养基是DMEM(高糖)培养基

3. 据反映DMEM养B16-F10,细胞会很黑,分泌黑素量比较多;而1640养比较白,黑素分泌量比较少。(依据实验需求可尝试更换培养体系,更换时建议留种);

4.更换为DMEM培养液培养时,请保证血清和培养液质量,不然营养问题会导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。

 

【常见问题】

Q: 收货时细胞出现伪足,或是碎片较多怎么办?

A:受到运输影响,悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象,如伪足等。通过传代培养,1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片,通过传代离心可以去除(见上文传代篇)。

Q:培养过程中细胞发生贴壁怎么办?

A: 少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。

Q:培养过程中细胞发生聚团怎么办?

A:少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开。

Q:培养基里一定要加β-巯基乙醇吗?

A:β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。

Q:镜下观察时,难以聚焦或估算密度怎么办?

A:悬浮细胞会随着液体流动,不容易聚焦,静置5-10min使细胞沉底,之后在轻轻放上显微镜观察,将有助于聚焦和估算细胞密度。

 
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