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18

2023

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05

鸡红细胞制备与常见问题

作者:

生航生物


鸡的采血

01、心脏采血

鸡右侧卧自然保定,从膝关节稍前下方处垂直地面进针采血。

要点:

(1)采血前鸡尽可能处于自然状态。

(2)垂直地面进针:刺入正确时,松开注射器,会看到注射器随心脏的自然跳动。

(3)先把针全部刺入,如采不出,可以一边向上提注射器,一边采血,注意向上提注射器时速度要慢。

02、翅静脉采血

(1)捏住近心端,让翅静脉臌起。

(2)针头斜面向上,小角度刺入翅静脉中,待出现回血时,松开近心端,固定好针头进行采血即可。

鸡红细胞如何制备?

以1%鸡红细胞为例

把采集过动物血液的采血管依次放入卡套内,并将放置于离心机对角线的两个卡套配平,使其重量相同(相差不超过0.2g),低温离心机4000r/min,离心10分钟。离心机的使用参照离心机的操作规程。

1、清洗红细胞

1.1 于超净台内采集上清液置于无菌血清瓶中即为血浆(不同的抗凝剂需做好标记),-20℃冷冻保存于固定区域

1.2 小心吸取红细胞上方的白细胞层,并弃去。

1.3 在每根吸除过白细胞的采血管中,加入和压积红细胞等体积的无菌1×PBS,并轻轻吹打混匀。

1.4 将混匀好的红细胞悬液转至15ml无菌离心管中,低温离心机2000r/min离心10分钟。

1.5 吸取上清液并弃去。

1.6 加入和压积红细胞等体积的无菌1×PBS,并轻轻吹打混匀。低温离心机2000r/min离心10分钟。重复1.5-1.6步骤一次,吸取上清液并弃去即为红细胞原液。

2、制作红细胞悬液

根据所需的红细胞百分比浓度,在血清瓶中加适量2-8℃保存的阿氏液和红细胞原液,制成1%的鸡红细胞悬液。

保存方法:(1%鸡红细胞保存条件:2-8℃,30天)

注意事项:

1、注意不要冻融

2、每天需上下轻轻颠倒混匀

3、注意无菌操作

4、2-8℃保存,尽快使用

5、尽量避免剧烈震荡

常见问题

1、 什么是溶血?

溶血,即血液中红细胞因为内外界各种原因破裂,血红蛋白溢出,导致血清、血浆由淡黄色变为血红色。实验过程中如果发生溶血现象,尽可能重新采血,因为溶血样本可能会对血液中的一些生化指标和激素含量产生影响。但若无法重新采血,只能根据自身需要测量的指标,将溶血与非溶血样本进行对照试验,判断是否有影响,如果无影响,即可使用溶血样本进行试验。

2、 如何判定溶血?

一般采用观察静置或离心后的标本来判断是否溶血。

【全溶血】溶液澄明,红色,管底无红细胞残留

【部分溶血】溶液澄明,红色或棕色,底部有少量红细胞残留;镜检红细胞稀少或变形

【不溶血】红细胞全部下沉,上清液体无色澄明;镜检红细胞不凝聚

【红细胞凝聚】溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀,振摇后不分散

3、哪些问题会导致溶血?

1、由于抽血困难,采血时定位进针不准、针尖在血管中探来探去造成血肿等而发生溶血。

2、注射器和针头连接不紧,采血时空气进入,或动物紧张导致血流不畅,抽血时间过长,都会导致血标本中混有泡沫,这种混有泡沫的血标本,放置一定时间后泡沫破裂或迅速干燥,造成血细胞破坏而发生溶血。

3、血标本在运输过程中(或离心前)过度振荡或储存不当。

4、不合格的塑料制品会因聚合不完全而具有毒性,这种毒性可造成溶血。

5、试管质量粗糙。

6、抽血消毒时,酒精未干就进行抽血。

7、操作过程中,可能引入的动物的毛发,而导致溶血。

8、尽量不要收集注射器推到最后的血,也不要使劲挤压注射器。

4、鸡红细胞有核吗?

有细胞核。人和哺乳类的红细胞是无核的,而鸟类、两栖类、鱼类的红细胞是有核的。人的红细胞本来也有核的,是在后来发育过程中才失去核的。

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