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16

2023

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05

合成培养基常见问题解答

作者:


 

Q: 什么是合成细胞培养基?

A: 培养基分很多种包括,合成培养基、天然培养基和半合成培养基,而其中的合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方,是一种理想的培养基。其基本培养基包括四大类物质:无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。常用细胞培养基有MEM细胞培养基系列、DMEM细胞培养基系列、RPMI-1640细胞培养基系列、199细胞培养基系列。

Q:合成培养基有哪些关键的理化性质?

PH: 通常最适pH在7.2~7.4之间,并且随细胞数量的增多和代谢活动的加强,二氧化碳不断被释放,培养液变酸,pH值发生变化。通常培养基用酚红指示PH

缓冲能力:细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统,因此细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2

渗透压:大多数哺乳类动物细胞,渗透压在260~320 mOsm/kg的范围内都适宜。

温度:温度过高可引起营养成份的降解或破坏,细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。

 

Q: 如何给我们的细胞选择合适的培养基?

1、MEM培养基:可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养,是最基本,适用范围最广的细胞培养基。

2、RPMI-1640培养基:是目前应用十分广泛的培养基。广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。

3、DMEM培养基:可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM/F-12培养基:将DMEM与F12按照1:1混合,混合后营养成分丰富。用于促进许多不同哺乳动物细胞的生长,包括 MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞和大鼠成纤维细胞。

5、McCoy's 5A培养基:McCoy's 5A含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖。McCoy's 5A广泛用于多种类型的原代细胞的培养,如骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等。此外McCoy's 5A培养基还用于组织活检培养、细胞建系,以及一些淋巴细胞和较难培养的细胞的培养。

6、Ham's F-12K培养基:在Ham's F-12的基础上提高了氨基酸和丙酮酸的浓度,降低了葡萄糖的用量,并修改了盐的成分和含量(Konigsbergs)。最初设计用于培养原代人肝细胞以及分化的大鼠和鸡的细胞。

7、IMDM培养基:用以培养红细胞前体细胞和巨噬细胞。IMDM培养基在DMEM培养基的基础上添加了硒、HEPES、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素,营养非常丰富,非常适合于快速增殖,高密度细胞培养。

8、Medium199培养基:含有独特的成分,包括腺嘌呤、腺 苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、以及其他的维生素。最初用于鸡胚成纤维细 胞的营养研究,现已广泛应用于各种动物细胞的培养,包括一些非哺乳类动物细胞。

森贝伽对于细胞培养能够做到一站式服务包括培养基,细胞,血清,缓冲液,抗生素,支原体清除剂,能够更全面的服务客户.

 

下面是代表细胞培养实物图

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Q:培养基使用过程中有哪些注意事项?

1.培养基的储存温度?

培养基通常在2-8℃下避光储存,避免在在低温条件下放置,否则会出现沉淀析出的现象。

 

2.培养基使用前需要注意什么?

使用培养基的时候,通常要在37℃预热半个小时到一个小时,4℃直接加入细胞可能会刺激到细胞,导致出现生长缓慢甚至是死亡的现象。

 

3.谷氨酰胺在使用过程需要注意什么?

大多数培养基中含有谷氨酰胺,由于液体的谷氨酰胺在4℃容易分解,因此在培养基培养细胞出现增长缓慢的情况,可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。

 

4.培养基储存冰箱有什么要求?

储存的冰箱需要可以准确控温,如果冰箱出现大面积结冰状态需要定期处理冰块,另外冰箱的的边缘可以用隔离板进行隔离以防边缘,以防温度过低出现培养基结冰情况。

 

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