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15

2023

-

02

RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)培养建议

作者:


英文名称:RAW 264.7

中文名称:小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

种 属:鼠源

组织来源:Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞。

生长特性:贴壁生长(胰酶会刺激分化)

细胞形态:不规则形

传代比例:1:2 ~ 1:3

换液频率:2~3次/周

倍增时间:12~30h

培养体系:DMEM(高糖)+10% Biochannel特级胎牛血清+1% P/S

培养条件:5%CO2 ;37℃

冻存条件:Biochannel 细胞冻存液,程序降温,液氮长期保存。

培养建议:

(a)在细胞生长的初始阶段,细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度,会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中,镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。

(b)该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时,用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。

(c)该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时,细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起,有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。

(d)血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化,应选用高质量的胎牛血清。

(e)该细胞不建议使用胰酶消化,胰酶会刺激分化; 超过3天不传代细胞容易分化;培养时,存在少量分化细胞,属于正常现象。

(f)若需控制细胞的分化,RAW264.7使用吹打传代,能更好地控制细胞分化率。

收货事项:

(a)RAW 264.7 细胞贴壁较松,在包装过程中切勿有剧烈的晃动。

(b)快递运输路上受到颠簸,也可能会脱落。

(c)脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦 。

收到货后把细胞放进培养箱静置两个小时后观察细胞,就可以看到了。如果静置后看到的细胞仍偏少,请将瓶子里的培养基都转移到离心管里,1200 rpm(约250g)离心3分钟,即可看到沉淀的细胞。细胞全部脱落,慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法,RAW 264.7脱落后倾向于抱团,抱团时细胞是活着的,但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞,不然细胞很难重新贴壁。

常见问题:

Q: 收货时细胞出现伪足,或是碎片较多怎么办?

A:受到运输影响,悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象,如伪足等。通过传代培养,1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片,通过传代离心可以去除。

Q:培养过程中细胞发生贴壁怎么办?

A: 少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。

Q:培养过程中细胞发生聚团怎么办?

A:少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开。

Q:培养基里一定要加β-巯基乙醇吗?

A:β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。

Q:镜下观察时,难以聚焦或估算密度怎么办?

A:悬浮细胞会随着液体流动,不容易聚焦,静置5-10min使细胞沉底,之后在轻轻放上显微镜观察,将有助于聚焦和估算细胞密度

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